猪腺病毒3型免疫过氧化物酶单层细胞染色检测方法的建立及初步应用OA
旨在建立一种猪腺病毒3型(PADV-3)抗体检测方法并开展临床血清抗体的调查与分析。利用PCR扩增PADV-3的Hexon和Protease基因,构建重组真核表达载体pEGFP-PADV-3-Hexon和pEGFP-PADV-3-Protease,采用双酶切及测序鉴定;将真核表达载体pEGFP-PADV-3-Hexon和pEGFP-PADV-3-Protease分别转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜观察蛋白亚细胞定位,通过G418筛选,建立稳定表达Hexon或Protease重组蛋白的2种细胞系,以其作为包被抗原,建立免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)对采自山东、山西、四川、黑龙江等地猪场的血清样品进行PADV-3 Hexon和Protease特异性抗体检测。结果:PADV-3 Hexon基因和PADV-3 Protease基因的读码框(ORF)分别为2 775 bp和615 bp,重组蛋白Hexon定位在细胞质中,Protease在胞质和胞核中均匀分布,G418筛选得到了稳定表达Hexon或Protease重组蛋白的2个细胞系。IPMA检测显示,来自12个猪场的446份血清样品中,Hexon抗体阳性率为39.69%,Protease抗体阳性率为34.75%;Hexon和Protease双抗体阳性率为32.29%;PADV-3抗体阳性样品合计188份,总阳性率为42.15%;哺乳仔猪、保育猪、育成猪、母猪和种公猪抗体阳性率依次为50.00%、36.64%、86.84%、47.37%和87.50%。综上,本研究成功建立了PADV-3抗体的IPMA检测方法,并证实PADV-3感染较为普遍,为进一步开展该病毒感染的防治提供了流行病学基础数据。
唐艺彤;刘婷;于向前;李雨昕;曾沛暄;朱丹;崔雅湘;吴慧蓉;曾婉佳;唐青海;危艳武
衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司,黑龙江哈尔滨150069衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室,湖南衡阳421008中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069
农业科技
猪腺病毒3型Protease基因Hexon基因血清抗体免疫过氧化物酶单层细胞染色法
《畜牧与兽医》 2026 (3)
P.66-74,9
国家级大学生创新创业训练项目重点领域支持项目(S202310546001)湖南省普通高等学校教学改革研究项目重点项目(HNJG20230871,23JP014)。
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