CYP11A1抑制剂ODM-209对细胞色素P4503A的激活作用及机制探究OA

目的探究CYP11A1抑制剂ODM-209对细胞色素P4503A(cytochrome P450,CYP3A)的激活作用及分子机制,为临床药物相互作用(clinical drug-drug interaction,DDI)风险评估提供依据。方法建立并验证一种LC-MS/MS分析方法,用于测定人肝微粒体(human liver microsomes,HLM)中咪达唑仑(midazolam,MDZ)的2种代谢产物1''-羟基咪达唑仑(1''-OH-MDZ)与4''-羟基咪达唑仑(4''-OH-MDZ)的浓度;通过7种主要CYP酶亚型抑制实验、浓度依赖性实验、酶动力学分析及重组人CYP3A4/3A5(rhCYP3A4/3A5)实验,明确ODM-209对CYP3A的作用及对细胞色素b5(Cyt b5)的影响。结果建立的LC-MS/MS方法符合生物样品分析要求;ODM-209对其他CYP酶亚型无显著影响,仅特异性激活CYP3A4介导的1''-OH-MDZ生成(EC50=3.262μmol/L),最大激活率296.2%,抑制4''-OH-MDZ生成(IC50=8.495μmol/L),酶动力学表现为米氏常数(Km)不变、最大反应速率(Vmax)值升高;该激活作用依赖Cyt b5,对CYP3A5无影响。结论ODM-209可浓度依赖性、Cyt b5依赖性激活CYP3A4,同时特异性调控咪达唑仑代谢途径,其作用机制可能与结合CYP3A4变构位点相关,可为临床合理用药及药物相互作用风险评估提供参考。