雷洛昔芬抑制口腔鳞癌细胞的作用机制研究OA

目的:探讨雷洛昔芬(raloxifene,RAL)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)恶性表型的影响及其潜在分子机制。方法:利用TargetNet、SEA、STITCH数据库预测RAL的作用靶点,通过GeneCards、MalaCards、OMIM数据库筛选OSCC相关靶点,采用Venny获取交集靶点,运用Metascape对互作靶点进行GO和KEGG富集分析,借助CytoNCA、Cytohubba及MCODE插件筛选核心靶点。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50)和增殖能力,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测核心靶点的mRNA水平,通过克隆形成、划痕和Transwell小室实验检测细胞的克隆生长、迁移和侵袭能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡及周期情况,利用转录组测序筛选差异表达基因并探究潜在分子机制,通过蛋白免疫印迹法(western blotting,WB)检测相关通路的活化水平;采用PI3K/AKT通路激活剂Recilisib进行功能回复实验,并通过裸鼠移植瘤模型评估体内药效。结果:共筛选出RAL治疗OSCC的58个潜在靶点,其中SRC、CASP3、HSP90AA1、TNF和AKT1被鉴定为核心靶点。RAL上调SRC、CASP3并下调HSP90AA1、TNF的mRNA水平(均P<0.05);RAL以剂量依赖性方式抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期(均P<0.05);联合网络药理学和转录组数据发现PI3K/AKT信号通路为RAL抗OSCC的核心作用通路;RAL处理导致p-PI3K和p-AKT磷酸化水平下调(均P<0.05);PI3K/AKT通路激活剂可显著逆转RAL对OSCC细胞恶性表型的抑制作用(均P<0.01),但未能逆转其对SRC等核心靶点的调控;体内动物实验证实RAL能显著抑制移植瘤的生长,抑瘤率达56%(均P<0.01)。结论:RAL可能通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活,并可能独立调控上游靶点,抑制OSCC细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡并阻滞细胞周期。