Notch2通过Wnt/β-连环蛋白信号通路影响急性心肌梗死大鼠心肌细胞损伤的分子机制研究OA

目的探讨Notch2通过Wnt/β-连环蛋白信号通路影响急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞损伤的分子机制。方法16只Wistar大鼠按随机数字表法分为AMI组和假手术组,每组8只。AMI组大鼠接受气管插管,用左前降支结扎法构建AMI模型。使用2,3,5-氯化三苯基四氮唑法观察大鼠心肌组织缺血情况;使用苏木精-伊红染色观察大鼠心肌组织形态;使用蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织中Notch2、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、磷酸化PKM2(p-PKM2)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)和β-连环蛋白表达量。从新生Wistar大鼠心肌组织中分离大鼠心肌细胞,随机分为5组:氧糖剥夺(OGD)组、OGD+sh-NC组、OGD+sh-Notch2组、OGD+sh-Notch2+SKL2001组和对照组。OGD组大鼠心肌细胞使用无葡萄糖DMEM以及缺氧(94%N2、5%CO_(2)和1%O_(2))环境孵育,以构建OGD模型。OGD+sh-NC组大鼠心肌细胞使用Lipofectamine 3000转染对照物sh-NC,再进行OGD处理。OGD+sh-Notch2组大鼠心肌细胞转染sh-Notch2后进行OGD处理。OGD+sh-Notch2+SKL2001组大鼠心肌细胞转染sh-Notch2后使用20μmol/L SKL2001处理24 h,随后进行OGD处理。对照组大鼠心肌细胞不作处理。使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测大鼠心肌细胞活性。使用流式细胞术检测大鼠心肌细胞凋亡率。使用蛋白质免疫印迹法检测大鼠心肌细胞Notch2、p-PKM2、Wnt3a和β-连环蛋白表达量。结果AMI组大鼠较假手术组发生了明显的心肌缺血和心肌损伤,心肌组织中Notch2、Wnt3a、β-连环蛋白表达量高于假手术组(均P<0.05),PKM2、p-PKM2蛋白表达量低于假手术组(均P<0.05)。OGD组大鼠心肌细胞活性低于对照组,凋亡率高于对照组,Notch2、Wnt3a、β-连环蛋白表达量高于对照组,PKM2、p-PKM2蛋白表达量低于对照组(均P<0.05)。OGD+sh-Notch2组大鼠心肌细胞活性高于OGD+sh-NC组,凋亡率低于OGD+sh-NC组,Notch2、Wnt3a、β-连环蛋白表达量低于OGD+sh-NC组,PKM2、p-PKM2蛋白表达量高于OGD+sh-NC组(均P<0.05)。OGD+sh-Notch2+SKL2001组大鼠心肌细胞活性低于OGD+sh-Notch2组,凋亡率高于OGD+sh-Notch2组,PKM2、p-PKM2蛋白表达量低于OGD+sh-Notch2组,Wnt3a、β-连环蛋白表达量高于OGD+sh-Notch2组(均P<0.05)。结论Notch2可能通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制大鼠心肌细胞糖酵解、降低大鼠心肌细胞活性,最终促进AMI恶性进展。