基于巨噬细胞极化探究清热化痰活血方抗动脉粥样硬化的作用机制OA

目的基于巨噬细胞极化探究清热化痰活血方抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法制备清热化痰活血方含药血清,以阿托伐他汀为阳性对照,用以处理RAW264.7巨噬细胞;检测巨噬细胞活性、凋亡率和CD86、CD206的荧光强度以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。将喂食高脂饲料的载脂蛋白e基因缺乏(ApoE-/-)小鼠(AS模型小鼠)随机分为模型组、阿托伐他汀组(2.6 mg/kg)及清热化痰活血方低、中、高剂量组(90、180、360 mg/kg),另将喂食普通饲料的C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每组10只;给药组小鼠灌胃相应药物,每日1次,连续8周。检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-1β水平,观察主动脉脂质沉积情况(以主动脉整体及根部斑块占比计)和主动脉根部的形态学变化,检测主动脉组织中CD86、CD206表达水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、AMP激活蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)蛋白表达水平。结果细胞实验结果显示,5~100μg/mL清热化痰活血方含药血清能显著提高RAW264.7细胞活性(P<0.05),10、50、100μg/mL清热化痰活血方含药血清和阿托伐他汀能显著降低RAW264.7细胞凋亡率、CD86荧光强度和TNF-α、IL-1β水平,并显著升高CD206荧光强度(P<0.05)。动物实验结果显示,与模型组比较,清热化痰活血方各剂量组和阿托伐他汀组小鼠血清中TNF-α、IL-1β水平,主动脉整体及根部斑块占比,CD86表达和iNOS蛋白表达均显著降低/下调,而CD206表达和Arg-1、PPAR-γ蛋白表达以及AMPK磷酸化表达均显著上调(P<0.05);主动脉病理形态均有不同程度改善。结论清热化痰活血方可通过调控巨噬细胞极化,增加M2型巨噬细胞比例,进而有效抑制AS斑块形成、减轻炎症反应,发挥抗AS的作用。