牛传染性鼻气管炎病毒UL18蛋白多克隆抗体的制备及鉴定OA

牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是临床常见病原,UL18蛋白是IBRV衣壳蛋白,具有高度保守性,且在不同IBRV毒株中相对保守。研究旨在制备针对UL18蛋白的多克隆抗体,为IBRV的研究提供材料。参照GenBank公布的IBRV全基因组序列,按照大肠埃希氏菌密码子偏好性合成UL18基因的CDS区域并连接至pET-32a载体,SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白的表达及其表达形式,对IPTG诱导浓度、温度和时间进行优化以确定最佳表达条件。利用Ni-NTA磁珠纯化蛋白并免疫Balb/c小鼠,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,并用Western blot和间接免疫荧光验证抗体的特异性。将合成的pET-32a-UL18质粒成功转化BL21(DE3)大肠埃希氏菌,命名为pET-32a-UL18(BL21)。经诱导表达发现UL18重组蛋白表达在包涵体中,以0.1 mmol/L IPTG在30℃诱导pET-32a-UL18(BL21)表达4 h时,UL18重组蛋白表达量最高。免疫小鼠后采集血清,间接ELISA结果显示,获得的鼠抗UL18蛋白多克隆抗体效价可达1∶409600。Western blot和IFA试验结果显示,该多克隆抗体能特异性识别IBRV UL18蛋白。本研究成功制备了高效价且特异性好的鼠抗IBRV UL18蛋白多克隆抗体,为进一步开展IBRV相关研究提供了材料。