肝癌痛小鼠模型的建立与评价OA

目的通过肝左叶种植hepa1-6肝癌肿瘤组织,建立肝癌痛小鼠模型,并通过观测行为学、影像学、组织学及分子生物学相关指标,评估模型的有效性。方法将100~150μL每毫升4×10^(6)个hepa1-6细胞悬液缓慢接种于小鼠前肢腋区皮下,待皮下肿瘤凸出体表,取皮下肿瘤切成大小约1 mm×1 mm×1 mm的肿瘤组织块。将SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假种植(sham)组和模型(model)组,每组30只。模型组小鼠于肝左叶种植hepa1-6肿瘤组织块,假种植组开腹后不种植。观察小鼠一般情况;利用弓背疼痛评分进行小鼠肝癌痛行为学评估;超声检测小鼠肝大体形态;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织结构、细胞构成及炎症细胞浸润情况;免疫组化(IHC)检测脊髓组织中小胶质细胞活化情况;实时荧光定量PCR(qPCR)检测脊髓组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达;Western Blot检测脊髓组织中IL-1β的蛋白表达。结果与假种植组相比,模型组小鼠一般情况明显异常,体质量降低(P<0.05);弓背疼痛评分显著升高(P<0.05);超声示模型组小鼠肝肿瘤组织凸出;HE染色示模型组小鼠肝组织结构异常,可见大量肿瘤细胞及炎性细胞浸润;免疫组化结果显示模型组小鼠脊髓组织中小胶质细胞的标志物(ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)的表达显著增多;qPCR结果显示模型组小鼠脊髓组织IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达显著增多(P<0.05);Western Blot结果显示模型组小鼠脊髓组织IL-1β的蛋白表达显著增多(P<0.05)。结论通过肝左叶种植hepa1-6肝癌肿瘤组织可以有效地建立肝癌痛小鼠模型;该方法建立的肝癌痛小鼠模型存在弓背疼痛行为学异常、肝组织形态及结构异常、疼痛因子和炎症因子活化现象,可作为肝癌痛研究的有效动物模型,为研究肝癌痛的发病机制及药物治疗效果提供有效手段。