糖尿病肾病湿证病证结合动物模型的构建与评价OA

目的构建2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中医“湿证”病证结合动物模型,并对模型进行宏观表征及微观指标评价。方法基于自发性db/db小鼠疾病模型,采用60%高脂饲料构建内湿证,探索DN湿证病证结合(TSSZ)动物模型的构建。观察各组小鼠的一般情况及体质量;测定小鼠的尿微量白蛋白肌酐比、血糖值、肾功能及糖脂代谢等生化指标;苏木素-伊红(HE)、PAS、Masson、油红O染色观察肾的病理学改变;PCR技术检测肾组织的微炎症和纤维化水平;免疫荧光法检测肾组织巨噬细胞极化程度;HE染色和PCR技术检测肠组织黏膜屏障情况;收集小鼠粪便,运用LC-MS技术检测粪便代谢组。结果与正常组相比,糖肾组的尿微量白蛋白肌酐比升高(P<0.05),HE和PAS染色提示明显肾小球基底膜均质性增厚,系膜区基质明显增生,PAS染色提示糖原沉积现象明显加重(P<0.05),符合DN疾病模型构建成功的标准;在宏观体征方面,与糖肾组相比,糖肾湿证组出现明显的皮毛滑腻出油、大便稀软、精神萎靡、倦怠乏力、扎堆蜷卧、多尿等现象,体质量明显增加(P<0.05);在脂毒性指标上,糖肾湿证组的总胆固醇指标明显升高(P<0.05),油红O染色见显著的脂滴沉积,糖肾湿证组的Masson染色提示明显的胶原蓝染,肾小球间质纤维增生加重(P<0.001),且促纤维化因子α-SMA、CTGF、FN、TGF-βmRNA表达水平显著升高(P<0.001);在微炎症水平上,糖肾湿证组的炎症因子TNF-α、MCP-1、IL-6明显升高(P<0.001),M1型巨噬细胞极化明显加强(P<0.05);在肠道微生态水平上,肠组织HE染色提示糖肾湿证组的肠道损伤加重,糖肾湿证组的肠ZO-1、Occludin mRNA表达水平明显降低(P<0.001),粪便代谢组学结果表明湿证造模影响相关代谢通路,包括α-亚麻酸代谢、色氨酸代谢等。结论采用60%高脂饮食喂养复合自发性db/db小鼠疾病模型的方法,能够成功构建2型DN湿证病证结合动物模型。该研究为后续深入探索2型DN湿证病证结合动物模型的构建及中药复方对DN的药效学提供了较理想的动物模型。