表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫的构建与鉴定OA

传染性法氏囊病严重制约家禽养殖业经济发展。因此,研发安全且高效的传染性法氏囊病疫苗成为当下备受瞩目的关键课题。为探索柔嫩艾美耳球虫作为活载体表达及递送传染性法氏囊病毒抗原的可行性,本研究构建表达该病毒VP2蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫株(Et-VP2)。构建表达质粒,酶切后核转染入柔嫩艾美耳球虫中,利用流式细胞分选技术筛选得到表达红色荧光报告基因(mCherry)的阳性虫株,在基因和蛋白水平上鉴定VP2基因的表达。结果显示,构建表达VP2蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫经雏鸡体内3次传代阳性球虫荧光率已高于95%,在球虫基因和蛋白水平上证实了外源基因的成功插入和稳定表达(后代群体荧光率均达95%),间接免疫荧光结果显示融合蛋白(Mic2-linker-VP2)定位于柔嫩艾美耳球虫子孢子顶端。本研究成功建立柔嫩艾美耳球虫稳定转染体系,为后续转基因虫株的传染性法氏囊病免疫保护研究奠定基础。