兔源多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌、大肠杆菌分离鉴定及混合感染致病性分析OA

旨在确定引起宁夏某规模化肉兔养殖场家兔死亡可疑病原并进行致病性分析。通过病死兔剖检、细菌分离培养、16S rRNA测序分析、PCR鉴定、药敏试验、小鼠和家兔攻毒试验,确定引起家兔死亡的病原菌及其致病性。结果显示,细菌分离培养出3株革兰阴性菌,经16S rRNA测序分析和PCR鉴定为荚膜A型多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌和大肠杆菌,分别命名为QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03。通过K-B法药敏试验发现QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03共同对青霉素、卡那霉素、头孢唑林等临床常用药物耐药,对头孢曲松敏感。耐药基因检测结果,3株分离菌均检出耐药基因aadB、strA、strB、blaTEM和sul1。毒力基因检测结果,巴氏杆菌携带exbB、exbD和hgbA等16种毒力基因,奇异变形杆菌携带ureC、zapA、atfC、atfA和pmfA毒力基因,大肠杆菌携带eaeA和fimC毒力基因。小鼠致病性试验显示,QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03的LD_(50)分别为9.27×10^(5)CFU、1.43×10^(6)CFU和1.88×10^(7)CFU。小鼠混合感染致病性试验结果,QF24-Pm01组、QF24-Ps02组和QF24-Ec03组小鼠分别于攻毒后9、18和16 h发生死亡,QF24-Pm01+QF24-Ec03混合感染组及QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组小鼠分别于攻毒后6和13 h出现死亡。病理组织学观察显示,单纯感染与混合感染均可导致肺、肝、肠等组织出现显著损伤。主要病理变化表现为:肺组织出现间质水肿、毛细血管充血及中性粒细胞浸润;肝组织呈现肝细胞脂肪变性及肝细胞索排列紊乱;小肠组织则表现为上皮细胞脱落及肠绒毛断裂等病变。家兔致病性试验结果显示,QF24-Pm01+QF24-Ec03混合感染组和QF24-Pm01组家兔分别于攻毒后24和36 h全部死亡,QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组、QF24-Ec03和QF24-Ps02组家兔攻毒后7 d死亡率分别为60%、20%和40%。试验兔剖检结果显示,QF24-Pm01+QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组家兔的肺出现充血、水肿,呈现花玻璃样改变,脾萎缩并呈深褐色,该病理变化与临床解剖所观察到的家兔病变一致。综上表明,多杀性巴氏杆菌与大肠杆菌混合后致病性增强,大肠杆菌与奇异变形杆菌混合后亦如此。多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌与大肠杆菌的混合感染可能是该场肉兔高死亡率的主要原因。因此在预防多杀性巴氏杆菌感染同时,还应加强对大肠杆菌和奇异变形杆菌的防控,以降低混合感染风险和死亡率。