右归丸减缓膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞焦亡的作用机制OA

背景:右归丸出自《景岳全书》,有研究证实右归丸对膝骨关节炎患者疗效显著,但作用机制尚不明确。目的:探讨右归丸改善大鼠膝骨关节炎的潜在分子作用机制。方法:48只SPF级SD大鼠采用随机数字表法分为4组,分别为空白组、模型组、右归丸组、塞来昔布组,后3组采用改良Hulth法对大鼠膝关节进行手术造模,伤口愈合后驱赶8周。造模结束后,塞来昔布组大鼠灌胃塞来昔布混悬液,右归丸组大鼠灌胃右归丸水煎液,假手术组与模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续灌胃4周。采用苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色、番红-固绿染色观察大鼠软骨组织病理变化,透射电镜观察大鼠软骨细胞超微结构,ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素18、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平,Western blot法检测大鼠软骨组织PI3K、AKT、NF-κB、p-PI3K、p-AKT、p-P65、NLRP3、GSDMD、GSDMD-N、Caspase1、Cleaved-Caspase1、白细胞介素18、白细胞介素1β蛋白表达。结果与结论:①与空白组比较,模型组大鼠软骨边缘严重破坏,软骨组织缺损,软骨层细胞变薄、排列紊乱,软骨下骨增生,潮线紊乱,软骨细胞结构损伤严重、焦亡小体形成,血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素18、白细胞介素1β水平显著升高(P<0.05),软骨组织p-PI3K、p-AKT、p-P65、NLRP3、GSDMD-N、Cleaved-Caspase1、白细胞介素18、白细胞介素1β蛋白表达均显著升高(P<0.01);②与模型组比较,右归丸组和塞来昔布组大鼠软骨结构趋于正常,软骨着色较深,软骨增厚,软骨细胞胞膜较完整,血清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素18、白细胞介素1β水平显著减低(P<0.05),软骨组织p-PI3K、p-AKT、p-P65、NLRP3、GSDMD-N、Cleaved-Caspase1、白细胞介素18、白细胞介素1β蛋白表达显著降低(P<0.01);③与塞来昔布组比较,右归丸组软骨细胞排列较规整,关节软骨表面较光滑,软骨层增厚明显,潮线相对完整,软骨细胞胞膜相对完整,血清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素18、白细胞介素1β水平显著减低(P<0.05),软骨组织p-PI3K、p-AKT、p-P65、NLRP3、GSDMD-N、Cleaved-Caspase1、白细胞介素18、白细胞介素1β蛋白表达显著降低(P<0.01)。结果表明,右归丸可改善膝骨关节炎大鼠软骨细胞炎症反应,作用机制可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB通路的激活,从而调控NLRP3/Caspase1/GSDMD通路介导的细胞焦亡相关。