构建基于类器官技术的小鼠体外溃疡性结肠炎模型OA

背景:溃疡性结肠炎的发病机制复杂,需要提供与人体生理病理反应更为贴切的模型来研究溃疡性结肠炎的发生发展机制。目的:构建小鼠溃疡性结肠炎类器官模型。方法:提取C57BL/6J小鼠结肠类器官,进行原代和传代培养。取传3代后的小鼠结肠类器官,加入不同质量浓度[0(对照),150,175,200,225,250,275,300,325和350μg/mL]脂多糖诱导结肠类器官炎症,孵育24 h后,显微镜下观察小鼠结肠类器官形态,CCK-8法检测增殖活力;孵育24 h后,ELISA法检测0,225,250,275μg/mL脂多糖组肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素9和白细胞介素10水平;孵育24 h后,免疫荧光染色检测0,275μg/mL脂多糖组闭合蛋白和闭锁小带蛋白1表达,q-PCR检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素9、闭合蛋白和闭锁小带蛋白1 mRNA表达。结果与结论:①显微镜下可见150-275μg/mL脂多糖组结肠类器官出现不同程度膨胀,300-350μg/mL脂多糖组结肠类器官生长和膨胀受到抑制;CCK-8检测显示,150-350μg/mL脂多糖可降低小鼠结肠类器官增殖活力,其中225-350μg/mL脂多糖的作用更明显。综合细胞形态与增殖活力检测结果,选择225,250,275μg/mL脂多糖用于ELISA检测。②与对照组相比,225,250,275μg/mL脂多糖组白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平升高(P<0.05),275μg/mL脂多糖组白细胞介素9水平升高(P<0.05)。③免疫荧光染色显示,与对照组相比,275μg/mL脂多糖组闭合蛋白和闭锁小带蛋白1表达降低;q-PCR检测显示,与对照组相比,275μg/mL脂多糖组白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达升高(P<0.05),闭合蛋白mRNA表达降低(P<0.05),白细胞介素9与闭锁小带蛋白1表达无明显差异(P>0.05)。④结果表明,实验构建了以类器官为基础的小鼠体外溃疡性结肠炎模型,为溃疡性结肠炎相关机制的研究和有效药物筛选提供了有力工具。