LAG3剪接变异体对肝癌细胞增殖及索拉非尼耐药的影响OA

目的构建在肝癌细胞表达的免疫活化基因3(LAG3)剪接变异体稳转细胞株,探讨剪接变异体对肝癌细胞增殖及对索拉非尼耐药性的影响。方法以Hep3B cDNA为模板,采用巢式PCR扩增LAG3基因,对琼脂糖凝胶电泳分离差异条带测序并与NCBI数据库中的LAG3转录变体对比,发现其相对人全长LAG3 mRNA缺少3号外显子(LAG3Δ3)。构建LAG3Δ3-pIGvetor重组质粒,通过慢病毒系统将重组质粒转染至Hep3B细胞,嘌呤霉素筛选后,利用RT-qPCR和Western blotting验证稳转细胞是否构建成功,MTT法评估细胞增殖及耐药性。结果筛选后的Hep3B-LAG3Δ3细胞LAG3Δ3 mRNA及蛋白水平较对照Hep3B-NC细胞增高(P<0.0001)。过表达LAG3Δ3细胞的增殖能力更强,其对索拉非尼的耐药性相比Hep3B-NC细胞有所增强(P<0.05)。结论成功构建Hep3B-LAG3Δ3剪接变异体稳转细胞株,LAG3Δ3可促进肝癌细胞增殖,减弱肝癌细胞对索拉非尼的敏感性。