牛MEG8-DMR的鉴定以及在克隆牛中的甲基化状态研究OA

为了鉴定牛MEG8基因差异甲基化区域(Differentially methylated region,DMR)的位置以及MEG8基因和MEG8-DMR在克隆牛中的表达和甲基化状态。本研究通过基于单核苷酸多态性(Single nucleotide polymophisms,SNP)的逆转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)产物直接测序法分析牛MEG8基因在野生牛和克隆牛中的等位基因表达状态;通过亚硫酸盐测序法确定牛MEG8-DMR位置,并分析克隆牛中MEG8-DMR区域的甲基化状态。结果表明,MEG8在牛胎盘中为母源等位基因表达的印记基因,MEG8-DMR位于MEG8基因内含子6中的CpG64及其下游区域(区域2)内,且MEG8-DMR在精子和卵母细胞中均为低甲基化状态,属于体细胞差异甲基化区(Somatic DMR,sDMR)。在2头克隆牛的MEG8基因上鉴定出有效的SNP位点(rs447583559和rs457974199),在其中1头克隆牛的5个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏)中,MEG8基因为单等位基因表达;而在另外1头克隆牛的肝脏、脾脏和肾脏组织中,MEG8基因为单等位基因表达,而在心脏和肺脏中为双等位基因表达。进一步分析MEG8-DMR的甲基化状态,在单等位基因表达的克隆牛组织中,MEG8-DMR的甲基化状态与野生型相似,存在DMR;而在异常双等位基因表达的克隆牛组织中表现出异常高甲基化。以上结果表明,在牛中MEG8-DMR区域的DNA甲基化修饰可能参与调控MEG8基因的单等位基因表达,为进一步探讨牛MEG8基因的调控机制以及在克隆牛供体核重编程中的作用提供参考依据。