感染后咳嗽寒饮伏肺证豚鼠模型的构建及验证OA

目的建立感染后咳嗽寒饮伏肺证豚鼠模型并对其进行验证。方法18只实验豚鼠随机分为空白组、咳嗽寒饮组、中药组,每组6只。除空白组外,其余两组采用烟熏、脂多糖滴鼻及柠檬酸雾化法建立感染后咳嗽豚鼠疾病模型,并在此基础上通过寒冷环境及喂食冰水联合干预14天建立寒饮伏肺证模型。造模结束次日,中药组给予疏风温肺止咳颗粒5.5 g/(kg·d)灌胃,空白组及咳嗽寒饮组均以等体积纯水灌胃,各组均每日1次,共7天。干预结束次日观察各组豚鼠一般情况,采用柠檬酸激发咳嗽记录5 min内咳嗽次数,HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测豚鼠血清中炎症因子[包括白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素8(IL-8)]水平和肺泡灌洗液中瞬时受体电位A1(TRPA1)通路及气道神经源性炎症相关因子[包括P物质(SP)、神经激肽A(NKA)]蛋白水平,RT-PCR法检测气管及肺组织TRPA1、SP、NKA mRNA表达水平。结果与空白组比较,咳嗽寒饮组豚鼠出现明显的精神萎靡,咳嗽,口鼻可见白色黏液分泌物,四肢不温,蜷卧不动,毛发凌乱无光泽、脱落,耳口唇欠红润,大便稀溏;中药组上述表现较咳嗽寒饮组减轻。HE染色显示咳嗽寒饮组肺泡壁增厚,并可见大量炎症细胞浸润,支气管管腔狭窄,局部支气管管壁不完整,有上皮细胞脱落;中药组支气管管壁增厚,有炎性细胞浸润,但整体较咳嗽寒饮组有改善。与空白组相比,咳嗽寒饮组豚鼠激发咳嗽次数明显增多,血清中IL-8、IL-1β水平升高,肺泡灌洗液中TRPA1、SP、NKA蛋白及气管与肺组织TRPA1、SP、NKA mRNA表达均升高(P<0.01);与咳嗽寒饮组比较,中药组豚鼠激发咳嗽次数明显减少,血清中IL-8、IL-1β表达升高,肺泡灌洗液TRPA1、SP、NKA蛋白及气管与肺组织TRPA1、SP、NKA mRNA表达均降低(P<0.01)。结论采用联合烟熏+脂多糖滴鼻+柠檬酸雾化、寒冷刺激联合喂食冰水法可成功制备感染后咳嗽寒饮伏肺证病证结合模型。