读书丸调控PI3K/Akt通路改善Aβ_(25~35)诱导HT22细胞线粒体凋亡的机制研究OA

目的:研究古方读书丸通过线粒体凋亡途径对Aβ_(25~35)诱导HT22细胞的保护作用及机制。方法:利用10μmol/L的Aβ_(25~35)诱导HT22细胞构建体外阿尔茨海默病(AD)模型,CCK-8法检测细胞活力筛选最佳培养时间及读书丸浓度,实验设置对照组、模型组、读书丸低剂量组(0.05 mg/mL)、读书丸中剂量组(0.10 mg/mL)、读书丸高剂量组(0.50 mg/mL)和盐酸多奈哌齐组。各组细胞给药预处理1 h加入Aβ_(25~35)诱导48 h,利用试剂盒检测细胞内Aβ_(1~42)、SOD、MDA含量,荧光探针检测线粒体总量、线粒体ROS、线粒体膜电位及通透性转换孔开放水平,透射电镜观察线粒体结构,qRT-PCR检测线粒体DNA拷贝数,蛋白质印迹法(Western blotting)检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组HT22细胞活力明显下降,细胞内Aβ_(1~42)、MDA含量增加,SOD含量降低,线粒体总量减少,线粒体ROS增加,线粒体膜电位坍塌下降,线粒体通透性转换孔大量开放,线粒体肿胀、线粒体嵴断裂,线粒体DNA拷贝数降低(P<0.05),细胞内p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组比较,经读书丸干预后,Aβ_(25~35)诱导的HT22细胞活力明显增加,细胞内Aβ_(1~42)、MDA含量减少,SOD活性升高,线粒体总量增加,线粒体ROS累积减少,线粒体膜电位上升,线粒体通透性转换孔关闭,被破坏的线粒体结构有所改善;读书丸高剂量组线粒体DNA拷贝数增加(P<0.05),细胞内p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达减少(P<0.05)。结论:读书丸能够明显改善Aβ_(25~35)诱导的HT22细胞线粒体氧化应激损伤和细胞凋亡,其潜在作用机制可能与调控PI3K/Akt信号通路有关。