鱼类黏液细胞及其分泌黏液的固定方法和染色效果比较OA

本文旨在对比4种固定方法对鱼类黏膜组织的固定效果,以筛选出最适合黏液细胞及其分泌黏液保存的固定方法。为此,我们以牙鲆(Paralichthys olivaceus)为研究对象,采用不同的固定方法(Methacarn和Carnoy固定液)和不同的固定时间(2和24 h)固定牙鲆黏膜相关淋巴组织(Mucosa-associated lymphoid tissues,MALTs),制备石蜡切片,进行苏木精-曙红(HE)染色、阿尔新蓝-过碘酸雪夫氏反应(AB-PAS)、荧光凝集素组织化学和免疫组织化学结合染色(CLIH)后,基于组织细胞形态学特征和3种参数(包括杯状细胞数量、黏蛋白染色面积和黏液层完整性),评估固定和染色结果。研究表明,通过AB-PAS染色,可以清晰地区别中性黏蛋白、酸性黏蛋白以及混合黏蛋白,进而将黏液细胞鉴别出4种类型,对黏液细胞和黏液层的染色效果优于HE染色。采用不同的固定方法和固定时间固定牙鲆黏膜组织后均可得到组织结构完整、黏液细胞清晰的组织切片,但固定和染色效果存在显著差异,Methacarn组的组织形态完整性、染色效果及黏液层保存效果明显强于Carnoy固定液处理的组织,最佳固定方案是采用Methacarn固定液固定2 h,该组牙鲆黏膜组织的形态结构更完整清晰,黏液层较少脱落,黏蛋白含量高,能清晰地观察到黏液分泌过程。本文筛选出了适于鱼类黏液细胞与黏液分泌观察的石蜡切片固定方法,可为后续研究鱼类黏液细胞分泌调控及其黏膜防御作用提供技术支持。