基于mTOR通路探讨杞黄颗粒对视网膜色素上皮细胞自噬的保护机制OA

目的通过体外实验探讨杞黄颗粒调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬的保护机制。方法筛选杞黄颗粒的最佳给药浓度和蓝光照射的最佳干预时间,构建RPE细胞氧化应激模型,分为模型组(MG)、叶黄素组(LG)、杞黄颗粒组(QH),另将未造模的细胞设为对照组(CG)。LG组加入叶黄素干预,QH组加入杞黄颗粒干预,CG组、MG组加入纯水干预,均培养24 h。细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞增殖率,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western Blot法分别检测自噬相关因子[磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、mTOR、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II、P62]的mRNA和蛋白表达。结果(1)条件筛选:杞黄颗粒的最佳给药浓度为78.80μg/mL,蓝光照射的最佳干预时间为120 min。(2)细胞增殖率:CG组72 h细胞增殖率高于24 h,MG组、LC组、QH组72 h细胞增殖率均低于24 h,差异均有统计学意义(均P<0.05)。24 h和72 h MG组RPE细胞增殖率均低于CG组,LG组、QH组细胞增殖率均高于MG组,QH组细胞增殖率高于LG组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。(3)mRNA:MG组RPE细胞PI3K、mTOR、P62 mRNA表达均高于CG组,LC3II低于CG组;LG组、QH组PI3K、mTOR和P62均低于MG组,LG组LC3II高于MG组;QH组PI3K、mTOR和P62均低于LG组,LC3II高于LG组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。(4)蛋白:MG组RPE细胞PI3K、mTOR和P62蛋白表达均高于CG组,LC3II低于CG组;LG组PI3K、mTOR和P62均低于MG组,LC3II高于MG组;QH组RPE细胞PI3K、mTOR和P62均低于MG组,LC3II高于MG组;QH组PI3K、mTOR和P62均低于LG组,LC3II高于LG组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论杞黄颗粒可以通过激活mTOR信号通路上下游因子,增强RPE细胞的自噬水平,发挥细胞保护作用。