调控miR-148a表达对水牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳相关基因表达的影响分析OA

MicroRNAs(miRNAs)是一类重要的转录后调控非编码小RNA分子,其在哺乳动物乳腺发育和泌乳过程中具有重要作用。前期研究发现,miR-148a在泌乳期水牛乳腺组织中的表达量显著高于非泌乳期,提示其在水牛泌乳过程中可能发挥重要的作用。为此,首先分离纯化水牛乳腺上皮细胞并进行鉴定,其次采用正负调控miR-148a表达方式分析其对水牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳相关基因表达的影响。结果显示,组织块培养法结合胰酶消化差异法可获得纯度较高的水牛乳腺上皮细胞,纯化的乳腺细胞具有典型的上皮细胞形态特征和分泌乳脂能力。与阴性对照组相比,50 nmol/L miR-148a模拟物可以显著降低DNMT1表达(P<0.05);30 nmol/L抑制剂可以显著提高DNMT1表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-148a可以显著提高水牛乳腺上皮细胞活力(P<0.05)、增加有丝分裂S期细胞比例,提高CyclinD1基因和泌乳关键基因PparG、Srebp1、Fabp3表达(P<0.05);抑制miR-148a表达可以显著降低水牛乳腺上皮细胞活力(P<0.05)、增加有丝分裂G1期细胞比例,降低S、G2期细胞比例,CyclinD1、Srebp1、Glut1和Fabp3基因表达量显著降低(P<0.05)。以上结果表明,miR-148a参与水牛乳腺上皮细胞增殖过程及调控泌乳相关基因表达,其与乳腺发育和泌乳密切相关。