血清来源外泌体携带miR-143-3p靶向调控BPTF影响胃癌恶性进展的作用机制OA

背景和目的:miR-143-3p可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移、细胞周期和上皮-间充质转化。BPTF作为一种致癌基因,在胃癌中高表达并与患者的不良预后有关。外泌体作为由各种细胞释放的一种具有脂质双层结构的外囊泡,携带miRNA可在胃癌的发生、发展中发挥抑癌作用。但血清来源外泌体携带miR-143-3p是否可通过靶向调控BPTF影响胃癌恶性进展目前尚不清楚。本研究旨在探究血清来源外泌体携带miR-143-3p靶向调控BPTF影响胃癌恶性进展的作用机制。方法:以实时荧光定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测胃癌组织及人胃癌细胞系MKN-45、HGC-27、MGC-803中miR-143-3p及BPTF的表达。提取并鉴定胃癌患者和健康志愿者血清中外泌体,并进行MGC-803细胞摄取实验。以蛋白质印迹法(Western blot)和双萤光素酶报告基因实验验证血清来源外泌体携带miR-143-3p对BPTF的靶向调控作用。将MGC-803细胞随机分为正常组、Exo-miR-143-3p组、siRNA-NC组、si-BPTF组、Exo-miR-143-3p+pcDNA组和Exo-miR-143-3p+pcDNA-BPTF组,采用血清来源外泌体携带miR-143-3p、BPTF siRNA阴性对照、BPTF siRNA空载质粒及BPTF过表达质粒分组干预后进行qRT-PCR和Western blot实验检测BPTF表达。采用流式细胞术、transwell及细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测细胞凋亡、侵袭、迁移及增殖程度。通过皮下接种MGC-803细胞构建BALB/c裸鼠移植瘤模型,采用相同分组和干预方法后检测裸鼠皮下肿瘤重量和体积。结果:与配对癌旁组织相比,胃癌组织中miR-143-3p表达显著降低(P<0.05),BPTF mRNA表达显著升高(P<0.05)。与GES-1细胞相比,MKN-45、HGC-27和MGC-803细胞中的miR-143-3p表达显著降低(P<0.05),BPTF mRNA表达显著升高(P<0.05)。本研究成功提取血清来源外泌体。血清来源外泌体可被MGC-803细胞成功摄取,且健康志愿者血清来源外泌体可上调MGC-803细胞中miR-143-3p的表达。血清来源外泌体携带miR-143-3p可靶向调控BPTF。与正常组相比,Exo-miR-143-3p组、si-BPTF组及Exo-miR-143-3p+pcDNA组BPTF的相对表达、侵袭数、迁移数、细胞活性、裸鼠皮下肿瘤重量和体积降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)。与Exo-miR-143-3p组相比,Exo-miR-143-3p+pcDNA-BPTF组BPTF的相对表达、侵袭数、迁移数、细胞活性、裸鼠皮下肿瘤重量和体积升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。结论:血清来源外泌体携带miR-143-3p可靶向下调BPTF抑制胃癌恶性进展。