苦豆碱阴道用温敏凝胶的制备及其药效学研究OA

研究苦豆碱温敏凝胶的处方和制备工艺,并通过抗生育、阴道刺激性及抗炎实验,进行初步药效学及杀精机制考察。采用体外杀精试验,确定苦豆碱最低杀精浓度。通过钙离子探针Fluo-4 AM,用流式细胞仪检测小鼠精子胞浆内钙离子浓度。利用qPCR技术分析了小鼠精子Ca 2+通道Catsper相关基因的表达,Catsper是精子中占主要地位的钙通道。选用泊洛沙姆407(poloxamer 407,P407)、泊洛沙姆188(poloxamer 188,P188)为温敏材料,以胶凝温度(gelling temperature,Tgel)作为评价指标,单因素试验筛选凝胶基质,正交设计优化处方和制备工艺,对最佳处方制备的苦豆碱温敏凝胶的Tgel、胶凝时间、pH及黏度进行考察;并研究苦豆碱温敏凝胶阴道用药的抗生育作用和刺激性,以及其对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抗炎效果。结果表明苦豆碱在酸性条件下的最低杀精浓度为25 mg/mL,与生理盐水对照组比较,苦豆碱组精子细胞浆内钙离子的平均荧光强度明显降低。低剂量苦豆碱处理精子后,可能通过对Catsper基因表达的调控,从而抑制细胞内Ca 2+水平。优化的最佳处方:P407为160 mg/g、P188为40 mg/g、丙二醇25 mg/g,苦豆碱载药浓度为25 mg/g,乳酸78.59 mg/g,乳酸钠100.80 mg/g。最佳处方制备的苦豆碱温敏凝胶平均Tgel为33℃,胶凝时间为97.67 s,pH为4.19,25℃时黏度为199.50 cP。25 mg/g苦豆碱凝胶组避孕率为100%;阴道刺激性实验病理学结果显示苦豆碱凝胶无明显的刺激性;同时能明显抑制小鼠耳廓肿胀程度。研究表明苦豆碱可能通过调控钙通道,降低精子细胞浆内钙离子内流,进而抑制小鼠精子活力。所制备的苦豆碱温敏凝胶制备工艺简单,温度敏感性好,用药方便,疗效优良,具有较好的研发价值和应用前景。