PDK1在ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及其功能障碍中的作用研究OA

[目的]探讨丙酮酸脱氢酶激酶同工酶1(PDK1)对内皮细胞损伤及其功能障碍的影响。[方法]采用siRNA-PDK1敲低PDK1的表达,并使用磷酸盐缓冲液(PBS)或氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以探究PDK1在ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及其生物学功能障碍中的作用。使用活性氧(ROS)及线粒体活性染色试剂盒检测HUVEC中ROS的产生及线粒体损伤状况。使用流式细胞凋亡试剂盒检测HUVEC的凋亡水平,并通过结晶紫染色和Dil染色检测HUVEC的损伤及其对THP-1细胞的募集和黏附能力的改变。通过Western blot和RT-qPCR检测CD86、CD206、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)等的mRNA和蛋白表达。通过免疫荧光染色评估CD86和CD206的表达水平。使用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量,采用ELISA试剂盒检测MCP-1、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)等细胞因子的分泌情况。[结果]与ox-LDL处理的HUVEC相比,敲低PDK1表达后,ROS的产生减少,线粒体损伤减轻,SOD活性恢复,MDA含量减少,细胞凋亡水平降低,核因子κB(NF-κB)和NLRP3炎症小体的激活受到抑制,炎症因子(IL-1β、IL-18)和趋化黏附因子(MCP-1、ICAM-1、VCAM-1)的释放减少,黏附的THP-1细胞数量减少,THP-1细胞中CD206、精氨酸1(Arg-1)的表达增加,THP-1细胞中CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达受到抑制(均P<0.05)。[结论]敲低血管内皮细胞中PDK1的表达可以减少ox-LDL处理引起的内皮细胞氧化应激和炎症反应,进而改善内皮细胞生物学功能。