Ⅱ型鲨鱼源单域抗体EF73在大肠杆菌中的稳定表达OA北大核心
Robust expression of the Type Ⅱ shark-derived single domain antibody EF73 in Escherichia coli
鲨鱼体内存在一种天然缺失轻链、仅含重链的重链抗体 IgNAR(immunoglobulin new antigen receptor),其可变区VNAR(variable domain of new antigen receptor)能够独立结合抗原,与骆驼科重链抗体可变区VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)共同被称为单域抗体.稳定重组表达是鲨鱼源单域抗体VNAR研究和应用工作的重要前提,但VNAR表达过程中容易出现不同批次间表达产量差异大的问题.目前,有关鲨鱼源单域抗体重组表达的研究报道很少,本研究以鲨鱼源Ⅱ型VNAR EF73 为研究对象,以在大肠杆菌中的稳定表达为目标优化表达策略.实验结果表明,采用多克隆表达替代常用的单克隆表达,以及将促溶标签TrxA与EF73融合表达等方式,可帮助EF73在大肠杆菌周质空间和胞质内两个区室均以可溶性蛋白形式表达,且批次间表现稳定.该研究为部分鲨鱼源单域抗体难以稳定表达的问题提出了解决方案,促进了鲨鱼源单域抗体的研究和应用.
Sharks produce a heavy-chain antibody known as immunoglobulin new antigen receptor(IgNAR),which lacks light chains.Its variable region,the variable domain of the new antigen receptor(VNAR),can independently bind to antigens.Together with variable domain of heavy-chain antibodies(VHHs),VNARs are referred to as sin-gle-domain antibodies.Robust expression of shark recombinant VNARs is crucial for their characterization and application.However,their expression and yield often suffer from significant batch-to-batch variability,and reports on the recombinant VNAR expression remain limited.In this study,we devised a strategy for optimizing the ex-pression of EF73,a Type Ⅱ shark-derived VNAR.Results showed that inoculating the initial culture with multiple colonies rather than a single colony,along with expressing EF73 as a TrxA fusion,consistently facilitated high-level expression of soluble EF73 in both the periplasm and cytoplasm.This strategy provides a practical approach to overcoming the challenges associated with VNAR expression and may promote further research and application of shark-derived single-domain antibodies.
丛思璇;邓鹏辉;徐明策;闻建晴;王淏;毕允晨
中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室,山东 青岛 266000||中国科学院大学,北京 100049中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室,山东 青岛 266000||中国科学院大学,北京 100049中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室,山东 青岛 266000||中国科学院大学,北京 100049中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室,山东 青岛 266000||中国科学院大学,北京 100049中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室,山东 青岛 266000中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室,山东 青岛 266000||中国科学院大学,北京 100049||青岛海洋科技中心 海洋生物学与生物技术功能实验室,山东 青岛 26600
生物科学
鲨鱼源单域抗体原核表达系统蛋白重组表达
variable domain of the new antigen receptorprokaryotic expression systemrecombinant protein expression
《海洋科学》 2025 (6)
86-97,12
国家自然科学基金(42306144)青岛市关键技术攻关及产业化示范项目(25-1-1-gjgg-76-nsh)the National Natural Science Foundation of China,No.42306144Key Technology Research and Industrialization Demonstration Project of Qingdao,No.25-1-1-gjgg-76-nsh
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