石斑鱼肠孢虫环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用OA
石斑鱼肠孢虫(Enterospora epinepheli)是当前危害石斑鱼(Epinephelus spp.)养殖产业的重要病原,但该病原自2017年报道以来,仅有2种基于核酸检测方法的报道。本研究以石斑鱼肠孢虫的核糖体小亚基r RNA(small subunit ribosomal RNA, SSU rRNA)基因为靶序列,设计3对环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)引物,建立了该病原的LAMP检测方法(LAMP for E. epinepheli, E.ep_LAMP)。添加EvaGreen^(®)核酸染料的检测体系置于定量PCR仪中,以2.68×10^(2)~2.68×10^(9)拷贝/μL的重组质粒标准品pMD18_E.ep为模板,各浓度均可在20 min内完全检测,检测灵敏度为2.68×10^(2)拷贝/反应;分析p MD18_E.ep中目的基因核酸拷贝数的对数值(x)与其对应Ct值(y)的线性关系得到检测方法的标准曲线:y=–1.719 5x+23.971(R2=0.996 2);重复性检测中,其批内和批间检测的变异系数(coefficient of variation, CV)范围分别为0.22%~3.52%和0.24%~1.70%。特异性检测中,E.ep_LAMP与虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)和肌孢虫(Ameson portunus)以及其他11种细菌和病毒均无交叉反应。E.ep_LAMP检测体系中使用核酸染料GeneFinder^(®)后,还可在简易恒温条件下进行现场检测,具有诊断试剂产品开发的前景。总体而言,本研究建立的方法快速、灵敏、特异性强,兼顾定量和可现场诊断的优点,可为当前频发的石斑鱼微孢子虫病的诊断及防控提供新的有效检测方法。
解恩佩;万晓媛;要菲;魏京广;吴成龙;史成银;张庆利;谢国驷;黄倢
湖州师范学院生命科学学院,浙江湖州313000 青岛海洋科学与技术中心,山东青岛266237 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室,青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室,山东青岛266071青岛海洋科学与技术中心,山东青岛266237 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室,青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室,山东青岛266071青岛海洋科学与技术中心,山东青岛266237 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室,青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室,山东青岛266071华南农业大学海洋学院,广东广州510642湖州师范学院生命科学学院,浙江湖州313000青岛海洋科学与技术中心,山东青岛266237 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室,青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室,山东青岛266071青岛海洋科学与技术中心,山东青岛266237 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室,青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室,山东青岛266071青岛海洋科学与技术中心,山东青岛266237 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室,青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室,山东青岛266071青岛海洋科学与技术中心,山东青岛266237 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室,中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室,青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室,山东青岛266071
农业科技
石斑鱼肠孢虫环介导等温扩增检测核糖体小亚基rRNA
《渔业科学进展》 2026 (1)
P.151-160,10
青岛海洋科学与技术中心山东省专项(2022QNLM030001)山东省重点研发计划(竞争性创新平台(2024CXPT071-3))国家重点研发计划(2022YFD2401102)中国水产科学研究院黄海水产研究所基本科研业务费(20603022023005)中国水产科学研究院海水鱼虾流行病学与病害防控创新团队项目(2023TD42)共同资助国家现代农业产业技术体系(CARS-48)。
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