基于核酸适配体TNA1c构建靶标激活式探针用于特异性检测石斑鱼神经坏死病毒的感染OA
石斑鱼神经坏死病毒(Nervous necrosis virus, NNV)作为石斑鱼养殖中最具破坏力的病毒性病原之一,对石斑鱼养殖业造成严重威胁,其引发的病毒性神经坏死病(viral nervous necrosis, VNN)会导致仔鱼和幼鱼大规模死亡。因此,需开发具备现场快速响应能力、操作便捷且兼具高灵敏度和特异性的新型检测技术,满足NNV早期诊断和精准防控的迫切需求。核酸适配体TNA1能够高特异性识别NNV感染细胞,本研究通过对TNA1进行结构改造和化学修饰,创新性地构建出一种靶标激活式核酸适配体探针(target-activatable aptamer TNA1c, TNA1c-TAA)。利用流式细胞术、激光共聚焦技术以及实时荧光定量PCR(qPCR)技术,对TNA1c-TAA的特异性、灵敏性、稳定性进行分析,结果发现,TNA1c-TAA能够高特异性地识别NNV感染的细胞,不识别其他病毒感染的细胞。TNA1c-TAA(500 nmol/L)在4~28℃范围内,能够在1 min内精准检测到1×10^(3)个NNV感染的细胞。活体水平检测结果显示,TNA1c-TAA可以特异性识别NNV感染的石斑鱼脑组织细胞,TNA1c-TAA检测样品的阳性率与qPCR检测结果一致,证实TNA1c-TAA具有应用于石斑鱼养殖中NNV感染快速诊断的潜力,为构建水产疫病“预防-诊断-控制”三位一体防控体系奠定了理论基础。
李淼;许尤厚;谢瑾琨;刘明珠;黄静;常彦磊;许伟江;黄琳;韩书煜;余庆;李鹏飞
北部湾大学海洋学院,广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室,广西钦州535011 广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西南宁530007北部湾大学海洋学院,广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室,广西钦州535011广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西南宁530007广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西南宁530007广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西南宁530007广东双螺旋基因技术有限公司,广东广州511453广东海洋大学水产学院,广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室,广东湛江524088广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西南宁530007广西壮族自治区水产技术推广站,广西南宁530199广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西南宁530007北部湾大学海洋学院,广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室,广西钦州535011 广西科学院广西海洋科学院,广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室,广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心,广西南宁530007
农业科技
石斑鱼神经坏死病毒快速检测技术核酸适配体靶标激活式探针
《渔业科学进展》 2026 (1)
P.161-171,11
广西自然科学基金(AD230263312022JJA1302812023GXNSFAA026325)国家重点研发计划(2022YFD2401200)广西科技项目(GUIKEFA[2024]102-2)共同资助。
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