小鼠抗猪PD-L2单克隆抗体的制备OA

【目的】制备猪源程序性死亡配体2(pPD-L2)蛋白特异性的单克隆抗体(mAb),用于其生物学功能研究及相关猪免疫抑制性疾病的诊断与治疗。【方法】构建pPD-L2原核表达质粒,进行目的蛋白诱导表达及纯化;将pPD-L2重组蛋白注射至小鼠中,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合后,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选能稳定分泌抗猪PD-L2的阳性杂交瘤细胞。采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)鉴定鸡脾脏、鸭脾脏、猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)、人非小细胞肺癌细胞(A549)、非洲绿猴肾细胞(Vero)和犬肾细胞(MDCK)与pPD-L2 mAb的种属交叉反应性。采用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测pPD-L2 mAb的适用性。【结果】成功获得一株能稳定分泌抗猪pPD-L2蛋白的杂交瘤细胞3C10。间接ELISA检测显示,该pPD-L2 mAb的效价高达1∶1×10^(7)。种属交叉反应性检测表明,该pPD-L2 mAb仅与猪源细胞(3D4/21)发生特异性反应,具有高度的种属特异性。Western blotting和IFA检测表明,该pPD-L2 mAb适用于检测pPD-L2蛋白的表达和定位。【结论】成功制备了一株特异性强、效价高的pPD-L2 mAb杂交瘤细胞3C10。