猫冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定OA

为制备猫冠状病毒(FCoV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体,本研究利用生物信息学预测工具对FCoV N蛋白序列进行分析,并通过原核表达制备N蛋白,将蛋白纯化处理后对BALB/c小鼠实施免疫,采用细胞融合手段获得杂交瘤细胞,并经过多轮亚克隆筛选流程成功制备单克隆抗体。通过效价测定、亚型鉴定及特异性分析等方式对该抗体进行系统性检测评估。生物信息学分析显示,N蛋白由377个氨基酸组成,理化特性分析表明其为亲水性不稳定蛋白,二级结构组成中α-螺旋占10.61%、β-转角占14.85%、无规则卷曲达74.54%;结构特征分析表明该蛋白既无典型信号肽序列,也不含跨膜结构域,但存在多个具有潜在免疫原性的B淋巴细胞表位区域。基于此,制备并获得了分子量约为67 kDa的FCoV N蛋白,并成功筛选出1株单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3A5),测定抗体效价为1∶256000,抗体亚型为IgG1型,Western blot及间接免疫荧光试验结果显示其能够与FCoV N蛋白和FCoV发生免疫反应。本研究结果为FCoV免疫学诊断、抗体药物研制提供了有力支撑。