骨疏康颗粒含药血清调节线粒体稳态改善地塞米松诱导的C2C12肌管细胞萎缩OA

背景:骨疏康颗粒是一种中药复方制剂,临床上常用于治疗骨质疏松症等骨骼相关疾病,但它在调控肌肉代谢中的作用尚不明确。目的:探究骨疏康颗粒含药血清对地塞米松诱导的C2C12肌细胞萎缩的抑制效果。方法:①体内实验:选取3月龄雌性SD大鼠36只,随机分为3组,每组12只,模型组大鼠肌肉注射地塞米松(2.5mg/kg),1次/d,连续给药1周,随后正常饲养3周;骨疏康组大鼠造模后灌胃0.48g/kg骨疏康颗粒混悬液,1次/d,连续3周;空白组未造模,灌胃等量蒸馏水,1次/d,连续4周。末次给药2h后,取左侧大鼠股骨及腓肠肌标本进行苏木精-伊红染色,提取右侧腓肠肌及股骨组织RNA,通过实时荧光定量PCR检测线粒体功能、自噬及炎症相关基因mRNA表达水平。②体外实验:培养C2C12细胞并用体积分数2%马血清诱导其分化为肌管细胞。将分化后的肌管细胞分为对照组、模型组和骨疏康含药血清组。通过4umol/L地塞米松孵育48h构建肌肉萎缩模型,其中骨疏康组在地塞米松处理24h后加入体积分数10%的骨疏康含药血清再干预24h。CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测活性氧水平,透射电镜观察细胞超微结构变化;Westernblot检测线粒体功能相关蛋白、自噬相关蛋白及抗氧化相关蛋白表达水平。结果与结论:①苏木精-伊红染色显示,与模型组相比,骨疏康组大鼠肌肉纤维结构恢复较好;实时荧光定量PCR进一步验证了骨疏康颗粒对线粒体功能和自噬相关基因具有上调作用,支持其通过多靶点机制缓解肌肉萎缩。②流式细胞术和CCK-8结果显示,地塞米松处理后C2C12细胞活性氧水平显著升高(P<0.05),细胞活力显著降低(P<0.05);透射电镜观察发现地塞米松诱导细胞超微结构紊乱,细胞器数量明显减少,线粒体呈现萎缩模糊状态,并伴随大量自噬小体及细胞质空泡的出现;Westernblot结果表明,地塞米松处理后线粒体功能相关蛋白线粒体外膜转位酶20、热休克蛋白60表达显著降低,自噬相关蛋白LC3和Beclin-1异常表达(P<0.05),沉默信息调节因子1表达显著降低(P<0.05),提示地塞米松破坏了线粒体稳态并抑制了自噬功能。经过骨疏康颗粒含药血清处理后,活性氧水平显著降低(P<0.05),细胞活力显著升高(P<0.05);透射电镜观察显示细胞超微结构有所改善,线粒体形态相对恢复;Westernblot结果显示,线粒体外膜转位酶20、热休克蛋白60、沉默信息调节因子1的表达显著上调(P<0.05),LC3和Beclin-1表达恢复至正常水平(P<0.05),表明骨疏康颗粒含药血清在改善线粒体功能、降低氧化应激以及调控自噬方面发挥了积极作用。