芳香温通法配伍干预防治心脏组织炎性衰老OA

背景:炎性衰老是自然衰老进程中机体呈现的低水平促炎状态,与心血管疾病等相关增龄性疾病的发生密切相关,目前尚缺乏以心脏炎性衰老为核心机制进行系统阐释的理论框架。目的:应用数据挖掘和网络药理学方法分析中医古籍中治疗心脏衰老的遣方用药规律,探索核心药物可能的作用机制。方法:①收集和整理从《中华人民共和国药典》2020年版、《中药学》第10版教材及《中医方剂大辞典》收录的中医古代医典著作中治疗心脏衰老病的方剂,对它们进行中药频数性味归经统计、关联规则分析以及聚类分析,筛选治疗心脏衰老的核心药对。进一步建立核心药对-活性成分-疾病-共有靶点网络模型,进行GO富集分析和KEGG信号通路分析。此外,借助分子对接及动力学模拟评估潜在关键靶标与活性成分之间的结合能力与稳定性。②验证实验:将60只C57BL/6小鼠随机分为3组干预:空白组(n=20)灌胃给予蒸馏水,麝香-附子低剂量组(n=20)灌胃给予2.64 g/kg麝香-附子,麝香-附子高剂量组(n=20)灌胃给予5.28 g/kg麝香-附子,每天1次,连续给药7 d。末次给药结束后,眼眶取血分离血清,分别获得不含药血清与麝香-附子低、高剂量含药血清。将第3代人心室肌细胞株AC16分3组处理,分别加入不含药血清与麝香-附子低、高剂量含药血清,CCK-8法检测细胞活力。将第3代人心室肌细胞株AC16分4组处理,对照组加入PBS;其余3组分别加入不含药血清与麝香-附子低、高剂量含药血清处理48 h,然后加入肿瘤坏死因子α处理4 h(诱导炎症模型),Western Blot检测核因子κB抑制蛋白、磷酸化核因子κB抑制蛋白、核因子κB p65、核因子κB p50蛋白表达。结果与结论:①从《中华人民共和国药典》2020年版中共发现268首方剂,剔除不同著作中重复收录及非治疗心脏衰老处方后,最终筛选出88首方剂,涉及36味中药。其中,药物使用频数较高的为肉桂、干姜、附子、薤白、麝香,这些药物性味以辛温为主,归心、肾和肝经,以芳香温通法治则为主。关联规则分析共得到4条强关联药组,支持度较高的为“麝香-附子”“肉桂-干姜”“干姜-附子”和“薤白-瓜蒌”(置信度≥90%),因子分析共提取4个公因子,体现了历代医家芳香温通的治疗思想,这4个核心药对可能通过影响炎症信号通路来减缓心脏衰老,它们的作用与心脏衰老标志物炎症占比较高相关。选取药对麝香-附子进行分子对接,结果显示关键靶点与该药对核心成分之间具有良好的结合能力及稳定性。②CCK-8检测显示,麝香-附子药对含药血清具有较高的细胞相容性。Western Blot检测显示,与对照组相比,肿瘤坏死因子α干预能显著导致核因子κB抑制蛋白磷酸化,释放核因子κB(p65/p50的二聚体)转入细胞核,表明炎症损伤模型建立成功;而麝香-附子药对低、高剂量含药血清干预能明显抑制肿瘤坏死因子α诱导的核因子κB抑制蛋白及细胞核中核因子κB(p65/p50)的上调。③结果表明,中医古籍中治疗心脏衰老主要以芳香温通法为治疗原则,其中以麝香-附子核心药对为主,该药对可能通过抑制炎性信号延缓心脏衰老的发展。