基于PDK2/PDH-Nrf2轴调控糖酵解和氧化损伤探讨温肺降浊方含药血清对OGD/R损伤HT22细胞的影响及分子机制OA北大核心CSTPCD

目的:基于PDK2/PDH-Nrf2信号轴调控糖酵解和氧化损伤途径,探讨温肺降浊方含药血清对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤HT22细胞的影响及分子机制。方法:通过OGD/R诱导HT22细胞复制血管性痴呆模型,设立正常对照组、模型组、DCA(丙酮酸脱氢酶激酶抑制剂)组和温肺降浊方含药血清组。CCK-8检测OGD处理HT22细胞最佳时间点及不同温肺降浊方含药血清对HT22细胞的最佳干预浓度和时间点;检测各组细胞内耗氧率和细胞外酸化率;ROS荧光标记各组细胞活性氧表达;免疫荧光双标观察细胞内PDK2、PDH阳性细胞表达;qRTPCR和Western Blot分别检测各组细胞内PDK2/PDH-Nrf2信号轴mRNA和蛋白表达。结果:OGD处理HT22细胞2 h、20%温肺降浊方含药血清干预24 h为最佳适合条件。与正常对照组比较,模型组细胞最大耗氧率、活性氧水平和PDK2阳性表达显著升高,最大酸化率和PDH阳性表达显著降低,PDK2 mRNA和蛋白及p-PDK2蛋白表达显著升高,PDH、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,DCA组和温肺降浊方含药血清组细胞最大耗氧率、活性氧水平和PDK2阳性表达显著降低,最大酸化率和PDH阳性表达显著升高,PDK2 mRNA和蛋白及p-PDK2蛋白表达显著降低,PDH、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:温肺降浊方含药血清可通过提高细胞有氧糖酵解能力,抑制线粒体氧化磷酸化,减少神经元细胞过度死亡,其机制可能与PDK2/PDH-Nrf2信号轴的激活有关。