大麻素受体Ⅰ对人根尖牙乳头干细胞神经向分化的影响OA

背景:研究证实大麻素受体Ⅰ能够促进神经干细胞和间充质干细胞的增殖及神经向分化,也可以调节人根尖牙乳头干细胞的增殖和矿化能力。然而,关于大麻素受体Ⅰ过表达对人根尖牙乳头干细胞神经分化的影响,目前国内外相关研究较少。目的:探讨大麻素受体Ⅰ在体外环境下对人根尖牙乳头干细胞神经向分化能力的影响。方法:收集因正畸治疗需要拔除的根尖尚未完全发育成熟的健康第三磨牙,采用组织块法和酶消化法进行原代人根尖牙乳头干细胞的分离培养。通过慢病毒介导的转染技术,将大麻素受体Ⅰ基因引入人根尖牙乳头干细胞中,设置空白对照组、阴性对照组和过表达大麻素受体Ⅰ组,通过Western blot验证过表达大麻素受体Ⅰ慢病毒转染效果;设置对照组、阴性对照组、过表达大麻素受体Ⅰ组和过表达大麻素受体Ⅰ+AM251(大麻素受体Ⅰ拮抗剂)组,分别在成神经诱导第1,5,10天采用CCK-8法检测细胞增殖能力,成神经诱导第10天采用qRT-PCR检测TH、NeuroD-1、NCAM1基因表达水平以及免疫荧光检测Nestin、TUBB3蛋白表达。结果与结论:①与空白对照组和阴性对照组相比,过表达大麻素受体Ⅰ组大麻素受体Ⅰ蛋白表达量明显升高,差异有显著性意义(P<0.05);②与空白对照组和阴性对照组相比,成神经诱导第5,10天时,过表达大麻素受体Ⅰ组人根尖牙乳头干细胞的增殖能力最强(P<0.05);③与空白对照组和阴性对照组相比,过表达大麻素受体Ⅰ组人根尖牙乳头干细胞中NeuroD-1、NCAM1、TH mRNA表达量显著增加,Nestin和TUBB3荧光强度显著增强(P<0.05);④与过表达大麻素受体Ⅰ组相比,过表达大麻素受体Ⅰ+AM251组人根尖牙乳头干细胞增殖能力显著下降,NeuroD-1、NCAM1、TH mRNA表达量以及Nestin、TUBB3荧光强度显著降低(P<0.05)。结果表明:过表达大麻素受体Ⅰ能促进人根尖牙乳头干细胞的增殖及神经向分化。