结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性OA北大核心CSTPCD

目的探究结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性。方法采用生物信息学方法预测PhoP蛋白的B细胞和T细胞表位。将Mtb H37Rv phoP基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化到E.coli BL21菌株中,经IPTG诱导表达及亲和层析法纯化获得PhoP重组蛋白。用ELISA分析Mtb感染小鼠和TB患者血清中PhoP特异性抗体水平。PhoP重组蛋白经肌肉注射途径免疫小鼠,分离小鼠多抗血清,用ELISA和Western blot分别检测抗体效价和抗体特异性。分离小鼠脾细胞,用ELISpot和ELISA法分别检测分泌IFN-γ细胞频数及其分泌水平。结果经生物信息学预测发现PhoP含有24个B细胞抗原表位和11个优势T细胞表位。成功构建PhoP原核表达载体并获得纯化的PhoP蛋白。Mtb感染小鼠和TB患者血清中的PhoP特异性抗体显著升高,查准率分别为99.9%和82.5%,特异度均为100%。PhoP免疫小鼠诱导产生高水平特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经抗原体外刺激后,IFN-γ的分泌水平和细胞频数均显著增加,IL-2和IL-10分泌水平上调。结论PhoP蛋白可诱导体液免疫应答和Th1型为主的细胞免疫。PhoP蛋白有良好的免疫原性,且具有一定的TB诊断效能。本研究为阐明PhoP在Mtb感染中的作用及其用于TB诊断奠定了一定的基础。