敲低WDSUB1通过抑制NF-κB通路减轻实验性小鼠结肠炎OA北大核心

目的 采用体内转染小干扰RNA(siRNA)和口服葡聚糖硫酸钠(DSS)的方法构建小鼠结肠炎模型,研究WDSUB1对小鼠结肠炎症损伤的影响并探讨可能的机制.方法 在小鼠成纤维细胞L929中转染不同的WDSUB1 siRNA序列,采用Western blotting(WB)检测的方法,选择WDSUB1敲低效果最佳的siRNA序列进行小鼠体内转染实验.选择12只雄性C57BL/6小鼠随机进行尾静脉注射siRNA(siWDSUB1/siControl),口服2.5％DSS饮用水,构建两组DSS诱导的结肠炎小鼠模型,根据siRNA不同,分为WDSUB1敲低组和对照组,6只/组.通过WB和RT-PCR方法验证两组小鼠结肠组织中WDSUB1的表达水平,记录实验过程中结肠炎小鼠的体质量及粪便性状,并进行临床症状评分.采用RT-PCR和WB方法,分别检测两组结肠炎恢复期小鼠结肠组织中炎性因子IL-6,COX-2,TNFα的mRNA表达水平,以及NF-κB通路中IκBα和P65的表达变化.结果 L929细胞中转染不同WDSUB1 siRNA序列后,选择敲低效果最佳的WDSUB12#完成体内转染,构建结肠炎小鼠模型.RT-PCR和WB结果均表明,WDSUB1敲低组小鼠的结肠组织中WDSUB1 mRNA和蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05).在分析两组小鼠结肠炎症状时,WDSUB1敲低组结肠炎小鼠的体质量丢失明显少于对照组,腹泻和便血程度较对照组也明显减轻(P<0.05).WDSUB1敲低组小鼠结肠组织中COX-2,IL-6和TNFαmRNA均明显低于对照组(P<0.05),且IκBα表达明显受抑制,而p65表达无明显变化.结论 敲低WDSUB1能够减轻实验性小鼠结肠炎症程度,此过程可能是通过抑制NF-κB通路和炎性因子表达实现的.