刚毛柽柳ThPHD3转录因子耐盐机制研究

解析盐胁迫下转录因子ThPHD3 在刚毛柽柳中的耐盐功能及调控机制。以刚毛柽柳为研究对象,在 150mM NaCl胁迫下,利用RT-qPCR方法分析ThPHD3 的响应模式。通过对瞬时转化获得过表达和抑制表达刚毛柽柳 ThPHD3 转基因植株及 ThPHD3 异源表达拟南芥株系进行盐胁迫下的表型及生理指标观测,综合评价ThPHD3 耐盐功能。通过RNA-Seq、Y1H、EMSA、ChIP-PCR等分子手段,解析Th PH D3 介导的刚毛柽柳响应盐胁迫的下游调控机制。此外,采用Y2H、BiFC筛选、鉴定ThPHD3 的互作蛋白。盐胁迫下ThPHD3 表达模式分析显示其能够受盐胁迫诱导。通过对盐胁迫下ThPHD3 转基因刚毛柽柳和异源表达拟南芥的表型及生理指标观测发现,过表达ThPHD3 通过增加保护酶类的含量,降低过氧化氢和丙二醛的积累,进而提高转基因植株的耐盐能力。同时利用Y1H、Y2H、BiFC及ChIP-PCR等遗传学和分子生物学手段证实ThWRKY2 与ThPHD3 互作,通过结合TCTC元件直接调控下游靶基因ThE3PUB23 基因的表达,参与刚毛柽柳盐胁迫调控。ThPHD3 与ThWRKY2 相互作用,调节下游靶基因ThE3PUB23 表达,提高刚毛柽柳ROS清除能力,减少细胞损伤,增强了转基因植物对盐胁迫的耐受能力,为探究林木耐盐机制提供一种新的思路。