香榧黑斑籽病原菌分离鉴定与室内药剂评价

[目的]揭示后熟过程中香榧黑斑籽形成的作用机制，筛选香榧黑斑主要病原菌的高效杀菌剂，为制定有效的防治措施提供科学依据。[方法]采集具黑斑的香榧假种皮、种壳和种衣，采用组织分离法纯化致病菌，完成致病性测定，结合形态学测定及 ITS、β-tubulin 多基因序列分析方法进行种类鉴定;采用菌丝生长速率法测定杀菌剂香芹酚、小檗碱、嘧霉胺、啶酰菌胺、吡唑醚菌酯、腐霉利、四霉素、咪鲜胺对香榧黑斑籽致病菌的室内毒力。[结果]1)从 90个黑斑籽病斑中共分离得到 88株致病菌，其中主要病原菌是毛色二孢属Lasiodiplodia 81株，葡萄座腔菌属Botryosphaeria 5 株，曲霉菌属Aspergillus 1株，镰刀菌属Fusarium 1株。选择分离频率较高的 3 种菌株(HK3、HP11、HP17)分别回接至健康的带蒲香榧籽、去蒲香榧籽及脱壳香榧籽上，发现均可形成黑斑，与野外症状一致，且可再次分离到相同菌株，完成科赫法则验证，证明其具有致病性。2)结合病原菌的形态学特征及ITS、β-tubulin多基因序列分析，HK3、HP11、HP17 菌株分别鉴定为可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae、假可可毛色二孢Lasiodiplodia pseudotheobromae、葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea.3)生物学特性分析显示，3个菌株的最适生长温度均为 25℃，35℃抑制生长，最适pH值均为 6，最适生长培养基分别为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、燕麦粉琼脂燕麦琼脂培养基(OA);最适 3种菌株生长的碳源和氮源不同，最有利于3种菌株生长的碳源分别为蔗糖、淀粉、乳糖，最有利于3种菌株生长的氮源分别为胰蛋白胨、氯化铵、硫酸铵。4)8种杀菌剂室内毒力测定结果表明，咪鲜胺对3种病原菌的抑制效果最佳，EC50分别为0.1、0.09、0.06 mg/L，其次是四霉素，EC50分别为0.47、0.59、0.73mg/L，效果最差3种杀菌剂为香芹酚、小檗碱，嘧霉胺;啶酰菌胺对假可可毛色二孢Lasiodiplodia pseudotheobromae室内毒力最好，EC50 为 0.52mg/L，但对其他两种效果较差;吡唑嘧菌酯对葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea效果最好，EC50为 0.63mg/L。[结论]Lasiodiplodia theobromae、Lasiodiplodia pseudotheobromae、Botryosphaeria dothidea可引起香榧采后过程中种籽黑斑，后续可采用杀菌剂咪鲜胺和四霉素为探索香榧采收前、采收后的防治措施。